Dag 3 och 4

 Under dag 3 och 4 har vi gjort: random priming + southern blot som innehåller olika momenter :( gelelektrofores , southern transfer ,fixering av DNA till membran, prehybridisering,hybridisering)+ Stringenstvätt + Detektion

 

Southern blot membran
 

 Bilden ovan visar membran och brunnar från vänster till höger är oklyvd plasmid, M III, klyvd plasmid, M IX). I den oklyvda plasmiden spalt ser vi ett band som innehåller inserten LL37 men de andra banden är en annan form av den plasmid t.ex open circular.

I M III och XI spalten finns det inget band och det tyder att vi har lyckats med stringenstvätt och proben har bundit specifikt till de klyvda och oklyvda plasmider som innehåller LL37.

Vi har bara en spalt av den klyvda plasmiden (0,005mikrogram) som den visas som ett band i bilden. Mendan vi har glömt den klyvda plasmiden  (0,5 mikrogram) och därför man inte kan ser det.

Nu har du gjort både PCR och Southern. Syftet med bägge metoderna var att ta reda på om LL 37-genen fanns i plasmiden. Jämför resultatet och diskutera för-och nackdelar med metoderna.

Vi har lyckats med PCR och Southern blot att bevisa att vårt plasmid innehåller LL37. Men vid jämförelse med både metoder kan man säga att PCR utförande är lättast och snabbare än den andra metoden.Medan de låga koncentrationer av 0,005 mikrogram av den klyvda plasmid kan ses i membranet när vi utfört southern blot. Och det är därför att denna metoden är känsligare än PCR. Men eftersom southern blot innehåller många momenter är det en stor risk att man göra fel under utförande av metoden.

 

2-Vad tycker du är det viktigaste som du har lärt dig under laborationen?
Jag har lärt mig att följa instuktioner när vi har labat under dagar (3 och 4)  eftersom de innehåller olika momenter. Och man måste vara noggran under utförande för att undvika fel som följden blir att man inte får bra resultat.